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胚胎移植又称受精卵移植，是将具有优良遗传性状的母牛与公牛交配后的早期胚胎取出，移植到另一头生理状态相同的母牛的子宫内，使其继续发育直到交货。 提供胚胎的母牛称为供体，接受胚胎的母牛称为受体。
胚胎移植技术主要包括供体牛的选择和饲养管理、超数排卵、人工授精、胚胎采集和质量鉴定、受体的选择和饲养管理、受体同步发情和胚胎移植。
该技术是继人工授精后肉牛养殖技术的又一次革命。 充分发挥了优良奶牛的遗传和繁殖潜能，大大增加了优良奶牛的数量。
我国牛胚胎移植的研究和应用已有30多年的历史。 它作为一项产业技术在养牛业得到广泛应用，为我国养牛业的改良做出了重要贡献。
1. 供体和受体肉牛的选择
供体牛应当具有高生产性能、明显的品种特征、良好的体型和外形、稳定的遗传性能、明确的系谱。
受种牛一般选择本地牛、杂交牛和低产奶牛。 供体牛的适宜年龄为1.5-8岁。 考虑到超数排卵的效果和胚胎打孔的方便性，最好选择1-1胎次的经产母牛。 受者应选择8岁以下性成熟的母牛，幼龄母牛应为成熟较大的。
供体和受体母牛均要求身体健康，无疾病，生殖功能正常，无流产史，产后60天以上，发情周期正常。 直肠检查子宫、卵巢发育正常，无生殖系统疾病。
奶牛个头较大，脂肪状况高于平均水平，性情温顺。 长期空孕、宫颈狭窄等不能作为供体或受体母牛。
2、饲养管理
营养是影响奶牛繁殖能力的主要因素。 供体牛和受体牛都要加强饲养管理，保证充足的优质青粗饲料、精料、维生素、矿物质等，以及干净的饮水。
对农村分散的牛，可采用集中统一管理的方法（1-2月龄），加强饲养管理。
三、供牛超排卵的处理方法
超排药物主要包括促卵泡激素（FSH）、氯前列醇（PG）或阴道栓剂（CIDR）。 在超排过程中供卵试管医院哪家好，供牛在发情后第9～13天连续4天早晚各12小时肌注FSH，注射FSH后第3天给予PG。
在实际应用中，通常同??时处理多头供体和受体母牛。 为了实现同步，经常使用以下两种方法。
两次PG+FSH方法：
以国产PG和FSH为例，首次肌肉注射4 ml PG后，供牛10天后再次注射4 ml PG。 第二次肌肉注射PG后第14天开始超排处理。
FSH连续4天早晚间隔12小时注射，连续4天注射量为70 IU/70 IU、60 IU/60 IU、50 IU/50 IU、40 IU /40 IU，总计 440 IU。 在注射FSH的第三天，同时注射PG。 PG注射后第2天（注射当天为第0天），早晚各1次授精，第3天视母牛发情情况再进行1次授精。
CIDR+FSH方式：
以进口药为例，供体牛第1天植入CIDR，第11天注射FSH，采用递减法，早晚间隔12小时注射，连续4天。 4天的注射体积为4ml/4ml、3ml/3ml、2ml/2ml和1ml/1ml。 第三天注射FSH的同时哪个试管医院最好，上午和下午各注射1.5ml PG，第四天上午注射FSH时取出CIDR，PG后第二天上午和下午分别授精1ml注射（当注射为 0 天时）。 第二次评价。 是否再次授精取决于母牛的发情情况。
4. 胚胎打孔程序
1、胚胎打孔时间：胚胎可在发情后第7天打孔（发情天数为0天），也可在第6天或第8天打孔。
2、固定及麻醉：供体牛按人工授精要求固定，2%普鲁卡因5-10ml尾部硬膜外麻醉。
3. 仪器和胚胎溶液的制备
所有器械必须严格按照无菌要求进行灭菌。 清洗结束后必须用双蒸水冲洗，接触胚胎的器具容器用洗蛋液冲洗； 洗蛋液必须预热（水浴或热水浸泡）至35-37°C。
4、超排效果检查：胚胎冲洗前，通过直肠检查卵巢黄体数量，确定可冲洗的胚胎数。
五、操作步骤
① 用干净的温水清洗外阴后，用消过毒的毛巾或卫生纸擦干净。 一般不使用消毒液，因为使用不当，会对胚胎造成伤害。
②用扩张杆打开颈椎通道并退出。
③用洗蛋液将洗蛋管内外冲洗干净，检查气球是否完好后再放入钢芯。
④将输卵管以直肠抓握法插入阴道，经宫颈插入输卵管一侧（左侧或右侧），到达子宫角大弯处时，将钢芯抽出约3厘米并放输卵管继续前进，以此类推，直至输卵管前端到达子宫角深部。 助手用注射器向输卵管气孔内注入9-18ml（根据子宫角大小），使气囊膨胀供卵试管医院，将子宫角堵住。 关闭气孔后，取出针头开始冲洗胚胎。
⑤助手用注射器吸取洗蛋液，每次15-30ml，从洗蛋管L]推入宫角。 流量可以用瓶子捕捉或直接用注射器回收。 一般一侧子宫角反复潮红7次左右。
⑥如需冲洗另一侧子宫角，按③④⑤重复操作。
⑦打胚胎时，每头牛用一个容器（瓶或滤杯）盛放回收液，注意保温，避免污染。
6. 术后处理
双侧子宫排卵后，放掉球囊内的空气，将卵巢冲洗管拉回宫体，从卵巢直接输注青霉素80万单位，链霉素100万单位，氯前列醇4ml冲洗管（用双蒸水或生理盐水稀释）。
5、胚胎检测
一、胚胎检测前的准备
胚胎检测实验室和各种用具必须提前消毒。 胚胎检测的室温要求为25℃。 如果温度低，应提前提高温度。
2、过滤回收
将回收蛋液直接倒入滤杯中，将滤杯中剩余的回收液约35毫升倒入盘中，用蛋液冲洗液冲洗滤杯2-3次，将液体冲入盘中，然后在立体显微镜下检查胚胎。
3、沉淀法回收
回收液静置20分钟后，用塑料管吸去上清液。 吸奶时，是根据虹吸原理进行的。 应控制液体的流速（用手或松开出水口）使其慢慢流出，并注意将上面的气泡排出，当液面仍有2～2.5厘米深时，将剩余的液体倒入两个培养皿中进行显微镜检查。
4.胚胎检查
在 6 x 1.5 放大倍数的立体显微镜下执行榆树胚胎。 用自制的玻璃微量移液器（玻璃管拉丝，背面有密封塑料管）吸取少量培养液吸出胚胎，转移到装有培养液的平板中。
六、胚胎质量鉴定与分级
1.放大倍率
胚胎质量鉴定一般在放大60～200倍的体视显微镜下进行。 如果受检显微镜的放大倍数有限，30倍也可以。
二、鉴定依据
在显微镜下根据胚胎是否分裂、形态颜色、卵裂球大小、均匀度、细胞密度、透明带及退化程度来鉴别。
①未受精卵。 没有卵裂球和细胞团的卵子。
②桑葚。 发情后5～6天洗出的卵中，只能观察到球形细胞团，不能区分卵裂球。 细胞簇占据透明带的大部分内腔。
③浓桑葚。 发情后第6～7天，卵子恢复，细胞??团变小，占透明带内腔的60%～70%。
④早期囊胚。 发情后第7～8天，部分细胞出现在明亮的囊胚腔内。 细胞团占管腔的 70% - 80%，因此很难区分内细胞团和滋养细胞。
⑤囊胚。 发情后第7-8天恢复的胚胎，内细胞团与滋养层边界清楚，囊胚腔明显，细胞充满透明带内腔。
⑥囊胚扩大。 发情后第8-9天恢复的胚胎，囊胚腔明显增大，体积增大为原来的1.2-15倍，透明带之间无间隙，透明带变薄，相当于正常厚度的1/3。
⑦胚胎孵化。 胚胎在发情后第9-11天恢复，因为囊胚腔继续扩大，透明带破裂，卵细胞出来。
3. 胚胎分级
冲洗胚胎一般分为A、B、C、D4级。
A级：胚胎形态完整，轮廓清晰，呈球形。 卵裂球大小均匀供卵生个儿子 ，结构致密，色调和透明度适中牛胚胎移植技术详解（牛受精卵移植技术），无贴壁细胞和空泡。
B级：轮廓清晰，色调和细胞密度良好，可见一些贴壁细胞和空泡。
C级：轮廓不清，色调暗淡，结构松散，游离细胞或液体较多，变性细胞30%～50%。
D级：未受精卵、少于16个细胞的受精卵、有碎片的退化卵、半数以上退化细胞的胚胎。
A级、B级、C级胚胎为可用胚胎，其中A级、B级胚胎可冷冻，C级胚胎只能用于新鲜胚胎移植借卵试管医院哪家好，D级胚胎是不能使用的胚胎。
7.新鲜胚胎移植
供体牛和受体牛同步发情，从供体牛身上获得的胚胎可以移植到受体牛的子宫中。
1.接收牛的同步
受体牛同步是指受体牛的发情时间与供体牛的发情时间基本一致，时间差最好早一天。 受体牛的数量一般是供体牛的5倍。
(1)前列腺素法
一次性前列腺素（PG）法：供体牛在给予前列腺素前一天，在发情周期第10天对受体牛进行直肠检查，选择黄体良好的受体牛进行1次肌肉注射前列腺素2-4毫升（根据母牛体重）诱导发情，发情后第7天移栽。
二次前列腺素（PG）法：空腹受体牛直肠检查后注射前列腺素2-4ml一次，11天后再次肌肉注射前列腺素2-4ml，发情后第7天移植。
(2)阴道栓加前列腺素(CIDR+PG)法
供体牛放入CIDR后第三天，将CIDR放在受体牛身上，约10天后取出CIDR。 同时肌肉注射4ml PG，于发情后第7天进行移植。
2.胚胎清洗
移植前应清洗胚胎。 方法是在培养皿中滴10～12滴培养液，每滴约0升毫升，用玻璃微量移液器吸取培养液，挤出少量培养液，按上述方法是从培养液中取出胚胎放入第一滴培养液中，倒空移液管，从第二滴培养液中吸出培养液，挤出少量培养液牛胚胎移植技术详解（牛受精卵移植技术），吸出胚胎。将第一滴放入第二滴培养基中，重复此过程，直至最后一滴洗涤完毕。
3、安装细管及胚胎移植器（枪）
用0.25毫升的塑料细管，先吸入约2厘米的培养液，建议吸入1厘米的空气，然后吸入胚胎，再吸入空气，再吸入培养液，两者之间留有气隙细管两端（即7阶段胚胎装载法），整个过程用微型注射器吸入。 胚胎输液器的安装与细管输精枪基本相同，但要特别注意无菌操作，手不能直接接触枪帽。 安装后应注意保暖，避免污染。 一般用消毒过的卫生纸或纱布包好头部，必须尽快注射到受体牛的子宫内。
4、受体与胚胎的合理配型
移植受体牛时，应考虑胚胎的发育情况和受体的发情时间。 一般发情6天的受体牛移植致密桑葚胚，发情7天的受体牛移植早期囊胚，发情8天的受体牛移植囊胚或膨胀囊胚。
5. 胚胎移植
受体牛的来源有两种，一种是使用同步受体牛，另一种是根据自然发情记录来确定。 无论采用哪种方法，都必须在胚胎输注前确认受体牛处于发情周期的第7天（6-8天），并通过直肠检查卵巢是否有明显的黄体。 只有发育正常才能移植胚胎，而且胚胎必须移植到有黄体一侧的子宫角深处。 操作方法与人工授精基本相同胚胎移植注意事项，不同的是胚胎移植部位在黄体侧的子宫角深部。 为尽量减少对子宫的刺激，避免损伤子宫，最好在3分钟内完成手术。
8. 胚胎冷冻解冻
一般来说，当可供特殊生产或新鲜胚胎移植使用的胚胎数量多于受体牛时，就可以进行胚胎冷冻保存。 以乙二醇作为冷冻保护剂溶液的冷冻过程如下。
一、装管方法
将冲洗过的胚胎装入 0.25 mL 细管中。 过程如下：用微型注射器连接细管胚胎移植注意事项，吸入约2.5厘米的保存液-0.5厘米的空气-0.5厘米的冷冻液-0.5厘米的含有一个胚胎的空气冷冻液-0.5厘米的空气-0.5 cm冷冻液-0.5 cm屋舍 吸入适量保存液，最后用毛细管塞密封。 一般应制作标签，注明胚胎系谱、冷冻方法、胚胎发育时期及等级等。
2.冷冻程序
使用全自动或半自动胚胎冷冻机进行胚胎冷冻。 程序如下：将胚胎冷冻仪冷冻室预冷至5.5℃（植冰温度），将装有胚胎的细管放入冷冻室平衡5-10分钟，植冰，然后平衡5-10分钟。 以每分钟 0.3°C 的冷却速率冷却至 -32°C。 平衡 10 分钟后胚胎移植注意事项，将细管放入液氮中保存。
3. 冷冻胚胎的解冻
以乙二醇为冷冻保护液制成的冷冻胚胎解冻后可直接移植。 解冻程序是：从液氮中取出装有胚胎的细管，置于空气中10秒，放入35℃温水中10秒，用消毒棉擦干，旋开塞子的细管，并将其放入移植枪中。
9.妊娠诊断
受体牛移植两个月后，通过直肠检查判断是否怀孕。
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